基因扩增仪的基因组DNA的提取及扩增技术

1.实验目的

基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法。实验原理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等，破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶环的共轭双键具有吸收紫外光的性质，吸收高峰在260nm处，所以，可用紫外分光光度法测定DNA的浓度。

2.基因组DNA提取试剂盒：

在高盐的状态下，DNA纯化树脂专一性地吸附DNA；而在低盐或水溶液状态下，DNA被洗脱下来。

1.实验目的

本实验以所提出的全血基因组DNA为模板，以线粒体基因上一段核苷酸为引物，扩增出924bp的扩增产物。学习并掌握PCR反应的基本原理与实验技术。实验原理 多聚酶链反应技术的原理类似于DNA的天然复制过程。

2.可简述为： 在微量离心管中加入适量缓冲液，加入微量模板DNA，四种脱氧核苷酸，和耐热Taq聚合酶及两个合成的DNA引物，并有Mg2+存在。 加热使模板DNA在高温下变性，双链解链，这是所谓变性阶段。 降低溶液温度，使合成引物在低温与模板DNA互补退火形成部分双链，这是所谓退火阶段。 溶液反应温度升至中温，在Taq酶作用下，以四种dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链，这是延伸阶段。

1.PCR仪基因扩增仪需要定期检测，视制冷方式而定一般半年至少一次。

2.PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1—2℃时，可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。

3.当然PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当PCR仪的降温过程超过60s，就应该检查仪器的制冷系统，对风冷制冷的PCR仪要较彻底地清理反应底座的灰尘；对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。