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恒温金属浴操作方法及常见问题对策

发布时间2014-01-13        浏览次数:544

  本公司作为一家专业性科学仪器销售公司,在科仪领域及相关行业享有较高声誉,是德国Sartorius 、Sigma、韩国FINEPCR 、英国ELGA、西班牙TELSTAR、美国Thermo、美国DENVER等多个外知名品牌的一级代理,并可从事进出口贸易。下面详细介绍恒温金属常见问题对策:

  1.变性温度与时间PCR反应中模板DNA的变性十分重要。只有完全性的模板DNA和PCR产物双链完全解开,才能有效的和引物结合。这种结合是PCR扩增的基础。变性温度越高,时间越长变性就越充分。

  但温度过高、时间过长又会影响Taq DNA聚合酶的活性,所以通常选用变性温度为95℃30s为宜。在PCR反应中个循环变性重要,需时间较长,因模板DNA的链比较长。

  2.复性温度与时间变性温度是PCR反应成败的关键,复性温度决定着PCR的特异性。温度越低复性越好,但是容易出现引物与靶DNA的错配,增加非特异性结合,温度太高不利于复性,大多数PCR反应的复性温度在55℃左右。确定了复性温度后,复性时间并不是关键因素。但复性时间太长会增加非特异的复性。