荧光定量PCR讲使用中的一些小技巧

  下面就详细讲讲荧光定量PCR使用中的一些小技巧

   先介绍荧光定量PCR原理：在PCR产物或引物中用dU 代替dT。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶，而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。

  它可以去除任何来源的污染；UNG处理可以和PCR扩增在同一个反应管内进行；由于扩增产物中有大量dU存在，可彻底消除污染源。
 
  在使用过程中特别提醒：

  1.要仔细阅读仪器使用说明书，这样可以充分发挥仪器的性能并避免发生错误

  2.程序设计完成后，一定要仔细检查，以免出错造成损失

  3.常用的程序调用以前使用过的正确程序文件

  4.样品量较小时，在样品槽的两边各加上两排8联管，这样可使热盖平整，加热效果好，有利于效果的稳定性

  5.在进行各种试剂加样时，相同的试剂要一起加后再分装，要用同一只吸液器及同一个枪头

  6.加样完成后，用酶联板离心转头将管离心一下，使反应液到管底，因为反应液在管壁或管盖上时，会严重影响实验结果。